Для захоплення мікробіологією мало мати тільки мікроскоп, Вам знадобитися безліч допоміжних аксесуарів: предметні і покривні скла, пінцети, препарувальні голки, розчини барвників, фіксатори, монтують рідини і найголовніше - мікротом.
Мікротом - це пристрій дозволяє виготовляти найтонші анатомічні зрізи біологічного матеріалу для подальшого вивчення під мікроскопом. Без мікротома зробити досить тонкий зріз, через який буде добре проникати світло, дуже складно. Найчастіше намагаються обійтися підручними засобами: бритвеними лезами, одноразовим скальпелем або канцелярським ножем.
Для якісного спостереження структури зразка необхідно зробити зріз товщиною не більше 50 мкм.
1 мкм (мікрометр) = 0,001 мм
50 мкм = 0,05 мм
На жаль, але без мікротома домогтися потрібного результату практично не можливо. Якщо Ви плануєте серйозно захоплюватися мікробіології, то задумайтеся над придбанням даного пристрою.
Різновидів мікротомів велика кількість, основна група яких відноситься до професійних лабораторним пристрою і лише кілька ручних моделей доступні для домашнього хобі. Далі мова піде саме про таких пристроях.
До нас в руки потрапили два ручних мікротома від торгової марки Delta Optical. Давайте детально вивчимо їх конструкцію і оцінимо можливості. Для більшої наочності порівняємо анатомічні зрізи з мікротомів зі зрізами, що отримуються від звичайного одноразового скальпеля, який можна купити практично в будь-якій аптеці за1-2 $.
Як біологічного матеріалу використовуємо листя і стебло товстянки - кімнатна рослина, багатьом відоме як «грошове дерево». З допоміжних аксесуарів нам знадобляться предметні і вартові скла, препаровальной голка або дуже гостре шило.
Отже, приступимо! Почнемо з найпростішого - зі скальпеля. Скальпель складається з пластикової ручки і маєте змінне лезо. Поставляється в герметичній упаковці і є стерильним. Скальпелі випускаються з різними за формою лезами. Для наших цілей найбільш вдалим виявився номер ....
Беремо наш зразок листа товстянки і притискаємо двома пальцями до твердої поверхні. У другій руці у нас скальпель. Вам необхідно виконати рух, аналогічне тому, що Ви робите при нарізанні капусти на кухні. Мета - отримати якомога більше тонкий зріз.
Зробіть 30-50 зрізів. Не впадайте у відчай якщо перші зрізи будуть занадто товсті. З плином часу Ви наб'єте руку і досягнете мінімальної товщини близько 50 мкм (1/2 мм). Отримувані зрізи переносите голочкою в вартові скла, в які додана вода. Без води зрізи швидко висохнуть і пристане до скла. Після буде складно віддерти їх від поверхні не пошкодивши клітинну структуру матеріалу.
Виберіть найбільш вдалі зрізи і перенесіть на предметне скло. Скло помістіть на предметний столик мікроскопа і проведіть спостереження. Якщо зріз вийшов у Вас досить тонким, то Ви запросто розгляньте клітинну структуру рослини.
Тепер можна перейти до простого мікротом від Delta Optical. Мікротом виконаний повністю з пластика. Складається з прямокутної основи, сполученого з круглим холдером, що утримує класичне бритвене лезо під пластиковою ручкою
Механізм працює дуже просто. З одного боку холдера Ви подаєте біологічний матеріал для різання і одночасно з цим обертає пластикову рукоять з лезом на зворотному боці холдера. Таким чином у Вас виходить анатомічний зріз.
На жаль, але подібна конструкція не здатна зробити зріз тонше ніж 50 мкм. Крім цього подавати матеріал дуже не зручно, складається враження, що пристрій сконструйовано для людей у яких три руки!
Однією рукою потрібно тримати мікротом, другою рукою подавати матеріал, а третин повертати лезо. Дуже Важливо, щоб встановлене лезо було максимально новим і гострим. В іншому випадку мікротом просто розчавлює матеріал, пошкоджуючи його структуру.
Зробіть кілька десятків зрізів і перемістити їх в вартові скла або в чашку Петрі з рідиною. Далі вибираєте вдалі варіанти і вивчаєте під мікроскопом. Порівняйте зі зрізами від скальпеля.
Ви переконаєтеся, що різниці в зрізах немає, а при належній вправності, скальпелем зрізи виходять навіть тонше. Отже, в даному випадку, можна обійтися звичайним скальпелем.
Після того, як ми навчилися користуватися скальпелем і простим мікротомів, можна перейти до складнішого handheld мікротом того ж бренду. Конструкція пристрою дуже цікава. Складається з мікровінта, захованого всередині корпусу пристрою, предметного столика з отвором оп центру і механізму фіксації біологічного матеріалу.
Корпус повністю металевий, поверхня столика скляна. Предметний столик обертається на 360 градусів. На не рухомий частини мікротома, на корпусі по колу нанесені поділки з цифровим позначенням від 0 до 50.
Цифри позначають мікрони. Один повний оборот мікротома дозволить зробити зріз товщиною в 50 мкм. При повороті мікротома на 1 розподіл у Вас вийде зріз в 1 мікрон (0,001 мм). Якщо досліджуваний матеріал буде досить щільним, то у Вас це вийде зробити.
Мікротом поставляється з ножем для різання матеріалу. На жаль, але ніж не заточений і Вам доведеться звернутися в спеціальну майстерню, де Вам доведуть його гостроту до стану бритви. Навіть не сумнівайтеся, в домашніх умови нагострити ніж у Вас не вийде. Не витрачайте даремно свій час і зверніться відразу до майстра.
Для виготовлення анатомічного зрізу Вам крім самого зразка знадобиться спеціальне облямовування. Справа в тому, що отвір в центрі предметного столика мікротома має діаметр в 14 мм, а стебло нашої товстянки діаметром 2-3 мм.
Як зафіксувати біологічний матеріал? Нам знадобитися оправлення. Її виготовляють з твердих овочів або фруктів, які мають малий вміст соку. Ідеальним варіантом можна вважати звичайну моркву.
Берете морква і вирізуєте з неї бочонок діаметром трохи менше 14 мм. Приміряєте до отвору на предметному столику. Далі ділите морква на дві частини вздовж. У центрі обох половинок вирізаєте жолобок для нашого стебла товстянки.
Укладаєте товстянку в жолобок і поєднуєте половинки моркви. Морква ставите в мікротом і добре фіксуєте. Стебло товстянки щільно затиснутий в моркви і тепер Ви зможете зробити надтонкий анатомічний зріз зразка.
Зробіть десяток з різів і перенесіть найбільш вдалі з них в чашку Петрі або годинне скло з водою. Далі один з зрізів в своєму розпорядженні на предметному склі і вивчаєте під мікроскопом. Ви побачите істотну різницю між зрізами, отриманими від ручного мікротома або скальпеля і зрізом, отриманому на більш складному мікротому.
Handheld мікротом дозволяє зрізати тільки один шар клітин. Їх структура чудово проглядається, чітко видно відмінність між клітинами серцевини і клітинами кори. Краще проникає світло, краще проникає барвник, простіше фіксувати і укладати матеріал під покривне скло. З вище сказаного можна зробити висновок, що найкращим варіантом для виготовлення анатомічних зрізів буде складний handheld мікротом.
 |  |  |
Зріз скалькпелем,
збільшення 40х | Зріз простим мікротомів, збільшення 40х | Зріз складним мікротомів, збільшення 40х |
На жаль, але вартість один мінус - це вартість пристрою. Мікротом може коштувати близько 100 $ і не кожен готовий разом з покупкою мікроскопа витратитися ще й на мікротом.
Якщо ж Ви не маєте фінансами, то можна на перших порах обійтися звичайним скальпелем. Що стосується усталеного ручного мікротома, то не рекомендуємо його купувати. Пристрій не зручно в експлуатації, якісний зріз отримати дуже складно.
